ChIP-IT® Express染色质免疫沉淀试剂盒

磁珠使ChIP快速,简单和更可重复

ChIP-IT Express KitChIP-IT Express Kit
ChIP-IT Express Enzymatic KitChIP-IT Express Enzymatic Kit
ChIP-IT Express Shearing KitChIP-IT Express Shearing Kit
ChIP-IT Express Enzymatic Shearing KitChIP-IT Express Enzymatic Shearing Kit
Siliconized TubesSiliconized Tubes
         

染色质免疫沉淀(ChIP)在技术上具有挑战性,并且结果难以解读。Active Motif的ChIP IT®Express试剂盒通过应用蛋白质G偶联磁珠的简化方案来消除其中的一些挑战,使ChIP只需一天就能完成。试剂盒提供超声或者酶消化两种方案制备染色质。使用Active Motif提供的ChIP-IT®对照试剂盒qPCR引物组引物组和已剪切好的染色质来完成您的实验设计,可以在每一步验证您的结果。要了解这些功能与我们提供的其他ChIP试剂盒的差异,请参阅我们的ChIP试剂盒选择指南

ChIP-IT® Express试剂盒亮点

  • ChIP-IT Express超声法对于难以裂解的细胞、培养细胞和组织样品来说是高质量的染色质片段化方案。
  • 如无超声仪,培养细胞系样本只需简单的使用我们的ChIP-IT Express Enzymatic kit。
  • 快速的操作步骤使ChIP实验在一天内完成成为可能。
  • 蛋白质G磁珠提供低背景富集和简化的洗涤步骤。

要了解更多有关ChIP-IT Express的信息,请单击下面的“说明”和“概述选项卡。找专家做实验?我们的表观遗传服务团队可以为您提供ChIP、ChIP-Seq和许多其他基因组范围的数据生成和分析服务。

Become a ChIP Assay Expert

 
Name Format Cat No. Price  
ChIP-IT® Express 25 rxns 53008 ¥7,540 Buy
ChIP-IT® Express Enzymatic 25 rxns 53009 ¥8,000 Buy
ChIP-IT® Express Shearing Kit (included in 53008) 10 rxns 53032 ¥3,580 Buy
ChIP-IT® Express Enzymatic Shearing Kit (included in 53009) 10 rxns 53035 ¥4,100 Buy
ChIP-IT® Protein G Magnetic Beads (included in 53008 & 53009) 25 rxns 53014 ¥4,030 Buy
Siliconized Tubes, 1.7 ml 25 tubes 53036 ¥1,530 Buy

ChIP-IT Express改善ChIP

ChIP-IT Express通过减少或消除几个耗时的步骤来改进传统ChIP。由于所提供的磁珠的背景比传统琼脂糖珠低得多,因此不再需要预先清理和封闭步骤。因为离心步骤已被快速磁性吸附取代,所以洗涤更容易。而且,与传统ChIP方案的8次洗涤相比,只需要3次洗涤。这大大减少了实验过程中的动手操作时间。这不仅节省了时间,而且减少了样本的操作次数,最大限度地减少了洗涤过程中可能发生的DNA损失,这有助于提高产量以及保持样本间的一致性。

优化的缓冲液减少背景

ChIP-IT Express试剂盒中包含的磁珠和磁条使ChIP更快和更容易,试剂盒的缓冲液也经过优化,为您提供更好的ChIP结果。洗脱和解交联缓冲液有助于减少背景,这使您能够识别较小的信号峰。背景的减少也使少量起始细胞的实验成为可能(请参见概览选项卡中的图2)。此外,这些缓冲液是规划一起使用的,所以您现在可以在从磁珠上洗脱DNA的同时进行解交联。

这些简单的改进使您能够快速、轻松地得到结果,让同时进行多个ChIP实验成为可能。使用ChIP IT Express试剂盒,您可以使用多通道移液器在PCR管中进行多个ChIP(图1和图2)。这种方法实际上使我们开发出了ChIP-IT Express HT试剂盒。这是一种高通量ChIP试剂盒,可以在96孔板上同时处理多达96个样本。

ChIP magnet
Pipette
图1 & 2:使用ChIP-IT Express处理多个样本

磁珠的应用使得免疫沉淀和清洗步骤更加快速和容易,因为磁珠颗粒聚集在试管的一侧,甚至被完全拉出缓冲液。在不干扰磁珠颗粒的情况下去除缓冲液更简单,这使得现在使用多通道移液器在PCR管中执行多个ChIP成为可能。

强力磁条

ChIP-IT Express试剂盒包含一个强力条形磁铁,可将移液枪头盒转变为用于免疫沉淀和清洗的磁性支架。P1000枪头盒可与Eppendorf管一起使用(图3),而P200枪头盒可与PCR管一起使用(图1和2)。其他商用的磁性管支架,例如Ambion(图4)和Promega的支架也可以使用。

ChIP tube
图3:使用标准枪头盒进行磁珠ChIP

ChIP-IT Express试剂盒包含一个强力条形磁铁,可将移液枪头盒转换为磁性支架,用于洗涤蛋白质G偶联的磁珠。

Tubes in rack
图4:ChIP-IT Express配套使用Ambion 6孔管磁性支架

商用的磁性管架,如Ambion和Promega的,也可以与ChIP-IT Express一起使用。

超声或可重复酶切方案的选择

成功的ChIP实验的第一步是将染色质打断成200-1000bp的片段。最常见的片段化方案是使用超声设备,如Active Motif的EpiShear™超声仪。然而,由于超声过程中乳化和过热的问题,使得超声方案很难优化。正因为如此,或者如果你没有超声仪,Active Motif已经开发出一种高效、温和的通过酶消化来剪切染色质的方案。因为Active Motif提供ChIP-IT-Express和ChIP-IT-Express Enzymatic试剂盒,所以您可以选择您喜欢的方法。更多完整信息,请点击此处了解。

ChIP配套产品和ChIP & ChIP-Seq验证抗体

为了简化实验问题排查、实验结果解读和验证抗体在ChIP中的可用性,Active Motif提供了物种特异性(人、小鼠和大鼠)ChIP-IT对照qPCR试剂盒,其中包含一个阳性对照抗体,一个增强小鼠单克隆抗体结合亲和力的桥连抗体,一个用于评估非特异性结合的阴性对照抗体,以及用于实时或终点PCR的物种特异性阳性和阴性对照引物。此外,我们还为人类、小鼠、大鼠、斑马鱼、果蝇和酵母中的许多常见ChIP靶点提供超过35种ChIP对照qPCR引物组。最后,Active Motif提供不断增加的ChIP验证抗体ChIP-Seq验证抗体,这些抗体非常适合与我们所有的ChIP-IT试剂盒和ChIP相关产品一起使用。

试剂盒是如何工作的?

ChIP涉及免疫沉淀经过交联固定的蛋白/DNA复合物。首先,完整的细胞用甲醛固定交联,从而保持蛋白和DNA的相互作用。然后,DNA被剪切成均匀的小片段,使用目标DNA结合蛋白的抗体免疫沉淀DNA/蛋白复合物。免疫沉淀后,DNA经过洗涤,解交联,蛋白被蛋白酶K处理去除。洗脱后的DNA可以用Active Motif的染色体免疫沉淀DNA纯化试剂盒进行纯化,纯化后的DNA可以直接进行qPCR或NGS测序下游分析。

ChIP-IT Express schematic
图1:使用ChIP-IT Express的染色质免疫沉淀示意图

ChIP-IT Express提供高质量的ChIP-Seq数据

使用3µg Active Motif的AbFlex®组蛋白H3K9ac重组抗体(目录号91103)和Active Motif的ChIP-IT Express试剂盒免疫沉淀25µg来自K-562细胞的染色质。在ChIP之后,使用下一代DNA文库建库试剂盒(目录号53216和53264)制备Illumina兼容测序文库,并使用NextSeq 500进行测序。结果显示高质量的ChIP-Seq信号峰横跨1号染色体的一个区域。

ChIP-IT Express ChIP-Seq data.
图2:使用ChIP-IT Express试剂盒免疫沉淀组蛋白修饰H3K9ac的ChIP-Seq数据

使用ChIP-IT Express富集组蛋白修饰H3K9ac的ChIP qPCR数据

使用3µg Active Motif的AbFlex®组蛋白修饰H3K9ac重组抗体(货号91103)和Active Motif的ChIP-IT Express试剂盒免疫沉淀25µg K-562细胞染色质。ChIP后,DNA按1:20稀释,使用Active Motif的人阳性对照引物组ACTB-1和GAPDH-1(货号号71003和71004),人阴性对照引物组1(货号71001)进行qPCR。结果以每1000个细胞检测到的结合情况展示,结果显示阳性对照PCR引物有富集,而阴性对照引物几乎没有富集。

ChIP-IT Express ChIP-Seq data.
图3:使用ChIP-IT Express试剂盒免疫沉淀组蛋白修饰H3K9ac的ChIP-qPCR数据

灵活订货选项

ChIP-IT Express和ChIP-IT Express Enzymatic 试剂盒分别包括蛋白质G磁珠,ChIP-IT Shearing或Enzymatic Shearing试剂盒中的剪切试剂。然而,根据每个剪切染色质样本的ChIP反应数量,您可能会在用完ChIP-IT Express试剂盒中的所有免疫沉淀试剂之前用完剪切试剂。为此,ChIP-IT Sonication & Enzymatic Shearing试剂盒蛋白质G磁珠也可以单独订购。

ChIP-IT Express试剂盒包含的试剂可进行25个ChIP反应。剪切试剂足够用于优化剪切条件及从三个15 cm的培养板(4.5 x 107个细胞)中进行5次染色质剪切制备;每次制备的染色质足够进行大约6次ChIP反应。我们建议您也购买适合您的样本类型的ChIP-IT对照试剂盒,因为使用经过验证的对照组有助于排查实验问题,解释您的结果并验证ChIP中使用的抗体。

组分 & 储存

蛋白质G偶联磁珠、条形磁铁、便签粘点、剪切缓冲液(或消化缓冲液和酶切混合物)、ChIP缓冲液1和2、洗脱缓冲液、解交联缓冲液、洗涤液和10X PCR缓冲液、10X PBS、10X 甘氨酸、1X 裂解缓冲液、蛋白酶抑制剂、PMSF、EDTA、蛋白酶K、蛋白酶K反应终止溶液和RNase A。试剂储存条件从室温到-20°C不等。了解完整的试剂组分及储存条件,请下载完整的试剂盒手册。所有试剂在正确温度下储存,保证6个月内稳定。

下面列出了使用我们的ChIP-IT®Express染色质免疫沉淀试剂盒的一些发表文章。

 

ChIP-IT® Express (Catalog #53008)

 

ChIP-IT® Express Enzymatic (Catalog #53009)

 

ChIP-IT® Protein G Magnetic Beads (included in Catalog #53008 & #53009)