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Ras GTPase Chemi ELISA kit 概览
Ras GTPase Chemi ELISA试剂盒是专门为研究激活态Ras而设计的，可用于检测和定量细胞或组织提取物中激活态的Ras GTPase。监测激活的Ras水平有助于研究新的Ras激活信号通路，检测致癌Ras蛋白，或评估可能的治疗性化合物的效果。
Ras GTPase Chemi ELISA试剂盒利用c-Raf激酶蛋白（Raf RBD）Ras结合域的独特结合特性，该蛋白仅结合被激活的Ras。GST融合的Raf RBD蛋白结合到96孔谷胱甘肽涂层的分析板上，向板上添加样品使激活态的Ras与Raf RBD结合。然后将Ras特异性一级抗体添加到各个孔中，紧接着添加HRP结合的二级抗体和显影试剂。然后在光度计上读取该板，该光度计可提供激活Ras的灵敏化学发光读数。96孔板的设计既适用于手动分析少量样品，也适用于自动高通量筛选分析。
Flow Chart of Ras GTPase Chemi ELISA Kit
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Ras GTPase 背景介绍
Ras蛋白是一种GTPase酶。GTP酶是一种能够结合和水解GTP的酶家族，起着分子开关的作用。当与GTP结合时，Ras具有活性并激活参与细胞增殖和分化下游控制的效应蛋白。当与GDP结合时，Ras处于非活动状态。
Ras信号级联通常仅短暂激活。这是因为Ras GTPase活性随着GTP转化为GDP，蛋白质逐渐失去活性。然而，Ras基因的致癌突变可以将蛋白质锁定在活性GTP构象中，从而形成一种始终活跃的蛋白质形式。结果是组成性活跃的Ras信号和细胞生长不受控制。事实上，Ras基因突变存在于约30%的人类癌症中，尤其是胰腺癌、肺癌和结直肠癌中。因此，Ras已成为癌症研究和抗癌治疗的热门靶点。 Learn more about targeting mutant Ras proteins in our Blog: Undruggable No More - Advances for Targeting Mutant Ras Proteins and Cancer.
Ras GTPase Chemi ELISA试剂盒的亮点
- 适用范围 – 每孔3-25 μg 全细胞提取物，或>0.6 ng 的纯化后蛋白
- 更好的结果 – ELISA原理，比Pull-down/Western更加准确灵敏
- 多用途 – 可使用细胞，组织提取物，以及纯化后的Ras蛋白
- 反应性 – 可检测人源K-Ras，H-Ras或鼠源的H-Ras
- 高效率 – 不到5小时即可获得结果
Ras GTPase Chemi ELISA试剂盒组分
Ras GTPase Chemi ELISA试剂盒包含足够的试剂，可完成96个反应。我们采用干冰运输，其中并包含具有多种存储温度的试剂。请在收货时确认收到所有试剂，并将物品储存在如下所示的适当温度下。所有试剂在按要求保存的情况下，可保持稳定长达6个月。该试剂盒包括以下组分：
- Hela whole-cell extract (EGF treated); Store at -80°C
- GST-Raf-RBD; Store at -80°C
- H-Ras antibody; Store at -20°C
- Anti-rat HRP-conjugated IgG; Store at -20°C
- Protease Inhibitor Cocktail (PIC); Store at -20°C
- Lysis/Binding Buffer AM1; Store at 4°C
- 10X Wash Buffer AM2; Store at 4°C
- 10X Antibody Binding Buffer AM2; Store at 4°C
- Chemiluminescent Reagent; Store at 4°C
- Reaction Buffer; Store at 4°C
- 96-well Glutathione-coated Assay Plate; Store at 4°C
- Plate Sealer; Store at 4°C
Ras GTPase Chemi ELISA 数据展示
图1：Ras GTPase Chemi ElISA 检测激活态RAS
使用Ras GTPase Chemi ELISA kit 检测用5 ng/ml EGF刺激2分钟的HeLa细胞的全细胞提取物。数据还显示了含有本底水平的未受刺激的HeLa细胞的Ras活性强度。
Ras GTPase Chemi ELISA试剂盒常见问题
是否能够使用冻存的组织或细胞做为起始样本？
为了获得更加准确的结果，我们建议使用新鲜的组织或细胞样本。这是个活性检测实验，冻存或经过融冻的样本可能会屏蔽实验效果。若冻存样本是唯一选择，我们建议在Complete Lysis buffer中解冻并完成均质化步骤。全细胞提取物可等分并储存在-80°C。避免反复的冷冻/解冻。
若我使用组织样本，该如何开始我的实验呢？
针对组织样本，则需对实验步骤进行一定的修改，在蛋白提取之前，需将其制备成单细胞悬液。我们建议使用核提取试剂盒，该试剂盒包含从组织制备全细胞提取物的完整方案。
哪些类型的Ras蛋白可被Ras抗体检测到？
H-Ras抗体可检测到人员的H-Ras和K-Ras，以及鼠源的H-Ras。
试剂盒中的对照是什么呢？
本试剂盒提供HeLa全细胞提取物（EGF处理后）作为Ras激活的阳性对照。提供足够的萃取物，每个板可进行8次反应。该提取物经过优化，以在25µg/孔的条件下使用时提供强信号。
有其它的阳性对照或阴性对照可用于此试剂盒吗？
实验手册中包含了建议，使用GTPγS或GDP作为任何全细胞提取物中的阳性和阴性对照的可选方案。GTPγS是Ras激活的激活子，而GDP是Ras激活的抑制子。
Ras GTPase Chemi ELISA试剂盒引用文章
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| Name | Format | Cat No. | Price | |
|---|---|---|---|---|
| Ras GTPase Chemi ELISA Kit | 1 x 96 rxns | 52097 | ¥12,680 | Buy |
